المواد وطرق العمل -:Materials and Methods مستىهما الدراسة :- األرساط الهرعية :Culture media رس أكار مستفىص البناطا ر الدكستررزagar -:Potato dextrose

Transcript

1 أهمية المستحضر الحيوي لبكتريا Bacillus subtilis في نمو نباتات الذرة الصفراء المخزنة لمدة ثالثة اشهر من االصابة بالفطرين Aspergillus niger و Aspergillus flavus أ.د. سامي عبد الرضا علي رملة احمد كلية العلوم / جامعة الكوفة الخالصة :- عند زراعة الحبوب المعفرة بالمستحضر الحيوي بعد مرررر 3( أشررر عىرخ نهاررا أعنرب اسرا أابرا عالية رصىب الخ % 100 مقاراه بمعامىة السينرة رالبالغة %83 مر ااففران اسربة مرو البرامرا مر %83 الخ صفر عند استعمال المستحضر الحيوي بتركيه 20 غم/كغم حبوب م تواجد لقاح الفنرniger..A ر أظررر تقردعر بعرا العناصرر المعدايرة الرررغر رالقبرر تر أرراج النباترا النات رة عر الحبروب المعامىة بالمستحضر الحيوي بتركيه 5 غم/كغم حبوب بعمرر الثالرة أسرابي زعرامة تر تركيره عناصرر النترررجي رالفسفور رالحدعرد ذ رصرىب الرخ 0.96 ر 0.52 ر مىغم/لترر عىرخ التروال ر حررىب زعرامة تر كميرة القىوررتيل a رb ت أرراج النباتا النات ة ع الحبوب المعامىة بتراكيه المستحضر الحيوي ركااب أعىخ زعامة ت كمية القىوررتيل عند استعمال التركيه 20 غم/كغم حبوب أ بىغب 5.3 ر 3.4 مىغم / 100 غم عىخ التوال المقدمة -:Introduction تقوم االحياء الم ررعة الموجومة بالتربة بوظيفة مرمة ت تنظريم حركرة المروام العضروعة المتحىىرة رتروتير العناصر الغذائية المرمة لىنبا مثرل الفسرفور رالنترررجي رالقراربوال تضرثأ عر أاررا ت عرل المقوارا الغذائيرة بشقل الئق لىنبا الت تؤمي الخ زعرامة المحاصريل ربشرقل ااتررامي حيرا اال السرمام الحيروي Biofertilizer هرو عبرارة عر أحيراء م ررعرة تعمرل عىرخ اتسراو النظرام ال رذري رزعرامة تر اابرا البرذرر رعفتىر السرمام الحيوي ع السمام العضوي رالقيميائ ت اال تقنية ذاتاجه تقوال بسينة ركىفرة ت ريره اىيىره تضرثأ ع أال تأالير عىخ امو النبا رحاصىة أتضل 2006( Chen حيا استعمىب سثلة بقترعا B Subtilis FZB24 سماماأ حيوعاأ لنبا القنر ممرا ام الرخ زعرامة تر امو ابا القن رحاصل الياف القن بنسبة 30% مقاراة مر السرمام االعتيرامي الرذي عحتروي عىرخ النترررجي رالفسرفور رالبوتاسريوم رععروم السربا الرخ زعرامة ح رم النظرام ال رذري رتحرعر االاهعمرا تر مننقرة المحري ال ذري ركذل الهعامة ت كمية المغذعا المأنو ة Yaoر جماعته 2006( رت مراسة تم تيرا معامىة برذرر الحننرة ببقترعرا Bacillus Subtilis رbrasilense Azospirillum رزراعترا لمعرتة تأاليرهما بوصفرما سماماأ حيوعاأ تحب الظرررف الحقىيرة حيرا رجرد براال اسرتفدام هرذ البقترعرا ام الخ زعامة كبيرة ت المساحة الوراية رتركيه القىوررتيل تضثأ ع زعامة الناتر مر حيرا القتىرة الحيوعة رحاصرل الحبروب PanwarرOmpal 2000( رأشرار Young رجماعتره 2003( الرخ أال السمام الحيوي المتمثرل بربعا أارواو البقترعرا التابعرة ل رن Bacillus سربا زعرامة مقردارها %25 ت امو محرول الف المواد وطرق العمل -:Materials and Methods مستىهما الدراسة :- األرساط الهرعية :Culture media رس أكار مستفىص البناطا ر الدكستررزagar -:Potato dextrose 1996( ر ل بأنذ 200 غم م البناطا بعرد غسرىرا رتقنيعررا ذلرخ حضر حسا طرعقة Collee رجماعته 20 مايقرة ربعردها رشرحب ذليررا لترر مراء مقنرر رغىيرب لمردة ان صرغيرة رعرعب تر ذاراء معردا الرم أعري ذلخ الراشح 20 غم م سقر الدكستررز ر 15 غم أكار رعقرم ب رراز الموصردة بوساطة انعة شاش اظيفة الم أعي A.flavus ر A.niger 1 جرو راسرتعمل الوسر تر عرهل الفنررع لمدة 20 مايقة بحرارة 121 م تحب عرغ رتشفيررما وسط مستخلص البطاطا والدكستروز :Potato dextrose broth

2 حضر بنف النرعقة الوارمة ت الفقررة لقر مرال اعراتة مرامة االكرار ذلرخ الراشرح راسرتعمل هرذا الوس لغرن ذكثار لقاح الفنرع A.niger ر Collee A.flavus رجماعته 1996( حبوب الذرة الصفراء Yellow Corn seeds جىبرب حبروب الرذرة الرفرراء مر االسرواج المحىيرة لمدعنرة الن ر حيرا اسرتعمل محررول العرررة الفرعفيرة لعرام 2007 لغررن عرهل الفنرعرا المىوالرة أمرا الت رارب الفهايرة تقرد طبقرب عىرخ محررول العررة الفرعفية لعام 2008 المادة الحيوية:- اسرتعمل مستحضرر حيروي مر لقراح البقترعرا.B subtilis محمرىة عىرخ مرامة كاربوارا القالسريوم CaCo 3 تم الحرول عىيه م مفتبر بحوث الفنرعا ت اسم عىوم الحياة /كىية العىوم طرائق العمل :- عزل الفطرين A.niger و A.flavus وتشخيصهما من حبوب الذرة الصفراء: جىبب حبوب الذرة الرفراء م منراطق مفتىفرة الن ر القوترة أبوصرفير رالعباسرية( عقمرب سرنحيا بمحىول هاعبوكىورا الرومعوم بتركيه %3 لمردة 5 مارائق غسرىب بعردها بمراء معقرم الرم جففرب رزرعرب تر أطبررراج بترررري حارعرررة عىرررخ أكرررار مسرررتفىص البناطرررا رالدكسرررتررز (P.D.A) مررر اعررراتة 48 مىغررررام /لترررر كىورامفينيقول لمن امو البقترعا رععب نم حبا ت كل طبق أرب منرا محينية رالفامسة تر منترر النبق حضنب األطباج ت مرجة حرارة 25 م 2± لمدة 7 أعام ميفائيل ربيدر ) 1982 بعد ااتراء مدة الحضر تم حساب النسبة المئوعة لظرور الفنر م نثل المعاملة التالية:- عدد عينات التي ظهر فيها الفطر 100 Χ النسبة المئوية لظهور الفطر = عدد العينات الكلية 1978) Krebs الم تم تنقية عهلت الفنرع A.niger ر A.flavus بنقل ارص مر كرل مسرتعمرة رزرعره عىرخ طبق حاري عىخ رس P.D.A جدعد كرر العمىية عردة مررا شفررب العهلتراال اعتمراما عىرخ الرفرا الترنيفية الت رععرا Rapper رFennel 1965( حفظ عزلتي الفطرين A.niger و -:A.flavus م اميب العهلتاال ت أابوبت انتبار تحوي كل منرما عىخ رس P.D.A برورة مائرىة رحضرنتا بحررارة 25 2 ± رلمدة 7 أعام حفظب ت الثثجة لحي استعمالرا ت الت ارب المفتبرعة الثحقة تحضير لقاح الفطرين A.niger و -:A.flavus حضرر الوسر الغررذائ السررائل P.D.B ررزو ترر مرارج سررعة 500 مررل ربمعرردل 250 مرل لقرل مررج عقمب الدرارج ت جراز الموصدة رلقحب بأاراص م مستعمرة الفنر A.niger المنماة مسبقا عىخ رسر P.D.A بعمرر 7 أعررام رأجرعرب افرر العررمىية لىفنرر A.flavus رحضرنب جمير الردرارج بحررارة 25 م 2± لمدة 7 أعام لغرن استعمال الىقاح ت الت ارب المفتبرعة رالفهاية الثحقة اختبار كفاءة تراكيز مختلفة من المستحضر الحيوي لبكتريا B.subtilis فيي حمايية حبيوب اليذرة الصيفراء مين اإلصابة بالفطرين A.niger و A.flavus في المخزن:- تم تريئة 13.5 كغم م حبوب الذرة الرفراء ااتاج العررة الفرعفية لموسرم 2008 حيرا اسرمب الحبروب عىخ الثالة أاسام أساسية القسرمي االرل رالثراا عحتروي كرل منرمرا عىرخ 6 كغرم مر الحبروب لوالرب حبروب القسرم االرل بىقاح الفنر 10 5 x 3 A.flavus بوغ / مل( ر ل بوععرا ت كي ااعىوال اظي رأعي اليرا 25 مرل /كغم حبوب م معىق الفنر الرم رجرب االكيراع لعردة مررا لغررن توزعر لقراح الفنرر عىرخ اسرنح الحبروب أمرا القسم الثاا تتم تىوعثه باالسىوب السابق افسه باستثناء أعاتة لقاح الفنرر 10 5 x 3 A.niger بروغ / مرل( بعرد

3 االاتراء مباشرة م تىوعرا الحبروب بىقراح الفنررع كرل عىرخ حرد عومىرب الحبروب بتراكيره المستحضرر الحيروي حيا اسمب كمية الحبوب 6 (كغرم رالمىوالرة بىقراح الفنررA.flavus عىرخ أربعرة ااسرام الااوعرة رعر كرل منررا 1.5 كغم( ت كي ااعىوال اظي رمعقرم حيرا أعريفب تراكيره المستحضرر الحيروي 5 ر 10 ر 20 ( غم/كغرم ركرل عىخ حد الخ حبوب كل كي م االكياع الثثالة الم رجب جيدا لتوزع المستحضر الحيوي عىخ أسنح الحبروب بعد ل رزعب محتوعا كل كي م الحبوب المىوالة بىقاح الفنر رالمعامىرة بتركيره المستحضرر الحيروي عىرخ الثث عبوا م البول تياايل كىوراعد( p.v.c ) )poly vinyl chloride ربقمية 500 غرم /عبروة ربواار الرثث مقررا أما القسم الثااوي الراب م الحبوب تىم عتم معامىته بالمستحضرر الحيروي رهرو االنرر رزو عىرخ الرثث عبروا ربرنف القميرة المرذكور سرابقا افسررا افذ الفنروا السرابقة افسررا عىرخ الحبروب المىوالرة بىقراح الفنرر A.nigerامرررا القسرررم الرابررر مررر االاسرررام االساسرررية غيرررر معامىرررة ال بىقررراح الفنرررر رال بالمستحضرررر الحيررروي التوصيف رمز المعامالت مرال أعاتة المستحضر الحيوي حبوب مىوالة بىقاح الفنر A.niger B0+A.N معامىرة بالمستحضرر الحيروي بتركيره 5 غرم /كغرم حبوب مىوالة بىقراح الفنرر A.niger B5+A.N حبوب معامىة بالمستحضر الحيروي بتركيره 10 غرم /كغرم حبوب مىوالة بىقاح الفنر A.niger B10+A.N حبوب معامىة بالمستحضر الحيروي بتركيره 20 غرم /كغرم حبوب مىوالة بىقاح الفنر A.niger B20+A.N حبوب مرال أعاتة المستحضر الحيوي A.flavus حبوب مىوالة بىقاح الفنر B0+A.F معامىة بالمستحضر الحيروي بتركيره 5 غرم /كغرم A.flavus حبوب مىوالة بىقاح الفنر B5+A.F حبوب معامىة بالمستحضر الحيوي بتركيه 10 غم /كغم A.flavus حبوب مىوالة بىقاح الفنر B10+A.F حبوب معامىة بالمستحضر الحيوي بتركيه 20 غرم /كغرم A.flavus حبوب مىوالة بىقاح الفنر B20+A.F حبوب حبوب بدرال تىوعا بىقاح الفنر رغير معامىة بالمستحضر الحيوي Control الت ربة كاالت :- 2006( ربذل تقوال المعامث المستعمىة ت ت محس ربعد مررر الثالة أشرر م نهال الحبوب تم حساب رتقدعر ماعى :- تقييم كفاءة و نشاط المستحضر الحيوي لبكتريا.B subtilis على نباتات الذرة الصفراء الناتجة من الحبوب المعاملة بالمستحضروالمخزنة لمدة ثالثة أشهر :- لغرن التعرف عىخ االر المستحضر الحيوي رتعاليته ت حال زراعة الحبوب ت التربة تم تريئة 27 أصيص انر 10 سم مىئب بتربة مهع ية غير معقمة اسمب عىخ الثث م موعا تضم كل م الم موعتي االرلخ رالثاايرة 12( اصريص الم موعرة االرلرخ مر االصرص ترم زراعتررا بحبروب الرذرة الررفراء المىوالرة بىقاح الفنرA.flavus رالمعامىة بتراكيه المستحضر الحيوي 0 ر 5 ر 10 ر 20 غم/كغم رالمفهاة لمدة الثالرة أشررر ربواا الثث حبوب لقل أصيص ركرر عمىية الهراعة ت أصص الثالة لقل تركيه مقررا ) اما الم موعرة الثااية م االصص تتم زراعترا باالسىوب الوارم ت أعث افسه باسرتثناء زراعرة الحبروب المىوالرة بىقراح الفنرر A.niger المعامىة بالمستحضر الحيوي ربالتراكيه أعرث افسره امرا الم موعرة الثالثرة تتمثىرب معامىرة المقارارة ر تضم الثالة أصص زرعب بحبوب لم عتم معامىترا بأي شئ رعرعب جمير االصرص تر غرترة النمرو growth champer المعموري 2008( رتم متابعة رحساب ماعى :- النسب المئوية لالنبات : حسبب هذ النسبة بعد 10 اعام م زراعة برذرر الرذرة الررفراء ر لر بحسراب عردم البرذرر النابترة رتقرا المعاملة االتية :- عدد البذور النابتة النسبة المئوية لالنبات = 100

4 العدد الكلي للبذور المزروعة النسب المئوية لموت البادرات : حسربب هرذ النسربة بعرد 10 اعرام مر االابرا لنبرا الرذرة الررفراء ر لر بحسراب عردم البرامرا الميترة راستفرجب النسا المئوعة لمو البامرا عىخ رتق المعاملة االتية :- عدد البادرات الميتة النسبة المئوية لموت البادرات = 100 العدد الكلي للبادرات النابتة مؤشرات النمو : حسبب بعد 3 اسابي م االابا لنبا الذرة الرفراء رتضمنب مؤشرا النمو : تقدير كمية الكلوروفيل aو b: 1973( مرر ذجررراء بعررا التحرروعرا النفيفررة عىيرررا لتقرردعر كميررة Harboren اسررتفدمب طرعقررة ر ل بأنذ رزال 0.5 غم م ارل الوراة رانر الرخ انر صرغيرة بسرقي حرامة رمعقمرة الرم كىوررتيل b رa م ذعاتة كمية اىيىرة مر كاربوارا القالسريوم Caco3 لتسرريل عمىيرة االسرتفثص بعردها سحق برارال نهت بواسرنة انعرة 20 مل اسيتوال %80 بعدها استمر عمىيرة السرحق رلمردة 10 مارائق الرم رشرح الفىري أعي 15 مرل اسريتوال %80 راعري مر الشرراش المعقرم جمرر المسررتفىص راعيرد الراسررا الرخ الررارال الفهتر ررشرررح عبرررر ررج ترشررريح اررروو ركررررر الفنررروا السرررابقة افسررررا بعررردها جمررر المسرررتفىص القىررر مدرج بعدها أكمل ح م الراشرح بعرد محمول عىخ بيقر زجاج No.1 Whatmman مثبب ت ام زجاج ااتراء عمىية الترشيح الخ 10 مل اسيتوال %80 استفدم جرراز ايراع القثاترة الضروئية Spectrophotometer Div spectronic (Analytical تررم تعييررر ال ررراز بواسرنة االسرريتوال الررم ارردر مرر ارروو (20 systems : - رحسا مقدار القىوررتيل b a, ر كاألت 663 ر 646 القىوررتيل بنوعيه عىخ النول الموج chl.b gm \ L =12.12(Ab663) -2.81(Ab646) chl.a gm \ L =20.13(Ab646) -5.03(Ab663) الم حسبب كمية القىوررتيل لقل 100 غم م النسي النبات ابل Zaehringer رجماعته ) 1974 ر ل با ستفدام المعاملة التالية رالموعرحة مر Gm \L 100 g Mg \100gm = 1000 ml sample w (g) تقدير بعض العناصر الكبرى والصغرى :- ترم تقردعر بعرا العناصرر المغذعرة القبرر رالررغر تر النباترا بعمرر الحبوب المعفرة بالمستحضر الحيوي بتركيه 5 غم /كغم حبوب:- 3 (أسرابي رالنات رة مر اابرا تقدير تركيز عنصر النتروجين:- تم رزال 0.2( غم م المامة ال اتة المنحواة لثرراج الوسنية رلقل معامىة م المعامث الفهايرة ررععب ت اابوبة الرضم )Digestion tube اعري لررا 5 مرل مر حراما القبرعتير المركره %99( ر 2 مل م حاما البركىورع المركه كعامل مساعد بعدها اعي نىي مر امرثح الرضرم بروزال 1 غرم K2SO4 رSeSO4 رCuSO4 ) ررععب االاابيا عىخ مسف رتم رت مرجرة الحررارة تردرع يا الرخ 450( مº الخ اال اصبح المحىول ازرج( برم االاابيا راكمل الح رم الرخ 100 مرل بالمراء المقنرر الرم انرذ مر هرذا

5 الح رم 10 مرل ررعرعب تر اابوبرة التقنيرر راعري لره 10 مرل مر هيدرركسريد الررومعوم ر تركيره 40%( ررعرعب االابوبرة تر جرراز تقنيرر النترررجي بعرد تشرغيل ال رراز ربردء عر بفرار المراء ترم جمر االموايا المتحررة م النمو ج ت بيقر عحوي عىخ 25 مل مر حراما البورعر بتركيره 2% ) مر انررتي م نىي مالئل Bromo Cresal ر Green Methyl red المذابتاال ت االعثااول تم جمر االموايرا حترخ اصبح ح م حاما البورك 50 مل الم ارافب عمىية التقنير سحح حاما البورك الحاري عىخ االموايا مر حاما الريدرركىورع 0.01N( 1958) رتقدر اسبة النتررجي حسا المعاملة:- حسا ح م الحاما المسترى Jackson ح م HCL المسترى x العيارعة x x ح م التففي =%N 100 وزن العينة تقدير تركيز عنصر الفسفور:- 0.5( غم م العينة الم ففة رالمنحواة لثرراج لىنباتا النات ة م كرل معامىرة مر المعرامث رزاب رترم اسرتفدام مرل مر حراما القبرعتير ر 2 مرل مر حراما البرركىورعر 5 الفهاية بعدها تم ا ابة العينة ت الضروئ عىرخ النرعقرة الىوايرة رترم القيراع باسرتفدام جرراز النير موليبيدا االموايوم رحاما االسرقوربي 700nm.(ابراهيم رجماعته 2000(. طول موج تقدير تركيز عنصر البوتاسيوم :- أنذ 50 مىغم م المامة ال اتة المنحواة لثرراج الوسنية لىنباتا النات ة م حبوب المعامث لرا 5 مل م محىول حاما النترع المركه رتم هضم بدرجة حرارة الفهاية ركث عىخ حد راعي 370 م لمدة نمسة ساعا عىخ مرجة الحرارة النات 180 م الخ اال اكتمىب عمىية الرضم الم جف وتم اياع تركيه البوتاسيوم باستفدام لرا 22.5 مل الماء المقنر نال م االعواا برم العينة راعي القراءة م ال راز مباشرة( ابراهيم رجماعته 2000( انذ المنياف الىرب تقدير تركيز عنصر الحديد :- العينة رطحنرا رجعرل النمرو ج عىرخ شرقل مسرحوج ررار بحيرا عمثرل النباترا النات رة عر تم ت في 5 مرل حراما مرل مر نىري حامضر 10 اليررا 1 غرم مر العينرة رأعري الحبوب المفهاه بعدها انرذ 1 مرل حراما القبرعتير ) الرم سرف الفىري حترخ مرجرة 75 م ر مرل حراما البرركىورعر 2 النترع ر مل بالماء المقنر ررع ت مررج ح م الرم ترم تقردعر تر المتبق الخ 25 بفر الفىي حتخ 0.5 مل الم نف اااوميتير ابراهيم رجماعته 2000( جراز االمتراص الذري عىخ طول موج النتائج والمناقشة :- تقييم نشاط وفعالية المستحضر الحيوي لبكتريا.B subtilis المعفر لحبوب الذرة الصفراء في التربة بعد نهاية ثالثة أشهر من الخزن:- نسب االنبات :- أالر الفنرراال A.flavus ر A.niger تر حيوعرة حبروب الرذرة الررفراء المفهارة كمرا هرو مبري تر ر %16 عىخ التوال عىرخ حري ارتفعرب اسربة االابرا تر 1( حيا ااففضب اسبة االابا الخ %33 جدرل 10 غم/كغم(حبروب اال احرد اهرم الحبروب المعامىرة بالمستحضرر الحيروي الرخ % 100 عنرد استعمرال تركيره الحبوب المعامىة بالمستحضر الحيوي هو كفاءة المستحضرر ت االسباب الت ام الخ رت اسا االابا A.flavus ر A.niger حيرا تشرير اترائ اسربة حمراعة الحبروب مر االصرابة بالفنررع الحيوي تر

6 االصابة الخ ادرة هذا المستحضر عىخ توتر حماعرة تامرة مر االصرابة برمرا رعمقر القرول مر نرثل اترائ اابررررررررا الحبرروب أال المعامىرررررررررة نسبة االنبات )%( المعامالت B0+A.N B5+A.N B10+A.N B20+A.N B0+A.F B5+A.F B10+A.F B20+A.F Control L.S.D (0.05) حفه االابا م نثل ادرة المستحضر الحيوي عىخ رت اسربة بالمستحضر الحيوي لبقترعا.B subtilis مقارارة ) الرخ % 100 رهرذا ربمرا الحبوب السىيمة رغير المرابة بأي مر الفنررع %83 ت االابا م رهنراك أملرة ااطعرة عىرخ اترراز هرموارا محفرهة لثابرا ععروم الرخ أمقاايرة البقترعرا.B subtilis.b ر B.cereus البقترعررا Bacillus كبقررترعا أالبتترررا أكثررر مرر مراسررة ارردرة بعررا أاررواو جنرر ر حراما االاردرل Indol Acetic Acid ر الهعراتي ال برلينرا عىرخ اترراز هرموارا Circulans 2008( ر لرذ الررمواا االر ت اابا البذرر ا اال البرذرر تقروال محراطة بنربقة رايقرة ال ميى رموسخ م نثعا حية غنية بالبررتي تسمخ طبقة aleuron Layer رهذ النبقة تحفه بواسنة ال برلينرا α-amylase رamylase - β رااررواو لتقرروع االاهعمررا المحىىررة رالترر ترضررم النشررا رالبررررتي كأاهعمررا محمررد راليرروا protease الترر تحولرررا الررخ مرروام بسيررنة ر ائبررة تستررعمل لتغذعررة ال نرري مفتىفررة مرر )1991 الجدول )1(: تأثير تراكيز المستحضر الحيوي في النسبة المئوية النبات حبوب الذرة الصفراء المزروعة. نسب موت البادرات :- أشار اتائ هرذا االنتبرار رالمبينرة تر ال ردرل 2( الرخ اال جمير تركيرها المستحضرر الحيروي ا اتائ جيدة ت نفا معدال اسا مو البامرا رجاء التركيره 10 ر 20( غم/كغرم حبروب تر مقدمرة تىر

7 التراكيره تر نفرا معردال المرو ا بىغرب % 0 رلقرث الفنررع تر حري ارتفعرب هرذ النسربة الرخ %16.5 ر %8.25 ت حال التراكيه 5 غم/كغم حبوب لىفنرع A.niger ر A.flavus عىخ التوال الجدول )2(: تأثير تراكييز المستحضير الحييوي فيي النسيبة المئويية لميوت البيادرات فيي حبيوب اليذرة الصيفراء المزروعة رارد ععروم سبرا تفروج التركريهع 10 ر 20 غم/كغرم عىرخ بقيرة التراكيره المسرتعمىة الرخ زعرامة اعدام البقترعرا تر مننقرة المحير ال رذري )Rhizosphere ربالترال توتيررها حماعرة أتضرل تقرد كررر عبررد الرعررا رجماعترره 2004( اال االصابررة بررالفنر Fusarium oxysporum تتناسررا عقسرريا مرر المعامالت B0+A.N B5+A.N B10+A.N B20+A.N B0+A.F B5+A.F B10+A.F B20+A.F Control L.S.D (0.05) نسبة موت البادرات )%( تركيه لقراح البقتررعا Pseudomonas putida تقىمرا زام كميرة لقراح البقترعرا اىرب اسبرة االصرابة تهعرامة كميرا المستحضرر الحيروي تعنر زعرامة تر أعردام البقترعرا تر مننقرة ال رذرر المترأالرة Rhizosphere راشار كثير م الدراسا رالبحوث الخ أال القدرة التثبينية لرذ البقترعا تأت م ادرترا عىخ ااتاج المضاما الحيوعرة Surfactin ر Mycosubtilin ر Fengycin التر لررا الفعاليرة العالية عىخ تثبي العدعد م الفنرعا المرعية Akpa ر جماعتره Kinsinger;2001 رجماعتره ; 2003 Leclere رجماعترره 2005 (ر اارررا تمتىرر القرردرة عىررخ ااترراج بعررا االاهعررما كررأاهعم Chitinase المحىل لمامة القاعتي رهو المقوال االساس ل دراال نثعا معظم الفنرعا الرااية رمنرا النااره )1996, PodilرPrakash تقدير كميات بعض العناصر الكبرى والصغرى:-

8 عنصر النتروجين :- ارعحب النتائ المبينة ت الشقل 1( اال اعىخ تركيه لىنترررجي كراال تر النباترا المعامىرة بالفنرر A.niger رالمستحضر الحيوي رمعامىة الفنرA.niger تق ا بىغرب 0.96 ر 0.93 مىغم/لترر عىرخ التروال بتفروج عال المعنوعة عىخ المعامث االنر تىترا النباتا المعامىة برالفنرA.flavus رالمستحضرر الحيروي رمعامىرة الفنر A.flavus تق رمعامىة المقاراة ا بىغب التراكيه 0.89 ر 0.82 ر 0.89 مىغم /لتر عىخ التوال راد ععوم سبا تفوج معامىة الفنرر رالمستحضرر الحيروي الرخ االرر البقترعرا المعرررف تر ت ريره النبرا بعنررر النترررجي تضرثأ عر العناصرر الغذائيرة االنرر تقرد كررYao رجماعتره 2006( اال البقترعرا.B subtilis FZB24 رتر العناصر الغذائية المرمرة لنمرو النبرا مثرل الفسرفور رالنترررجي رالقراربوال تضرثأ ع اارا تهعد م جاههعة العنرر م لدال النباتا ربالتال زعامة ت كمية المغذعا المأنو ة أر ارد ععروم السربا الرخ اردرة البقترعرا عىرخ تثبيرب النترررجي ال روي مباشررة ار الرخ زعرامة جاههعرة عنررر النترررجي لىنباترا مر نرثل تشر يعرا لنمرو العدعرد مر االحيراء الم ررعرة تر التربرة كالبقترعرا المثبترة لىنترررجي Rhizobial رالفنرعرا المراتقرة لى رذرر Mcspadden-Gardener 1994; Garbaye 2004( ر ععمل هذا المستحضر الحيوي عىخ حماعرة جرذرر النباترا مر االعررار الناجمرة عر الفنرر رالمتمثىرة بقتل رتحىيل كى أر جهئ لىم موو ال ذري لىنبا رم الم تنمو ال ذرر برورة طبيعية ت التربة مما عهعد مر تعاليترا ت امتراص العناصر الغذائية كالنتررجي رالفسفور عقوم النتررجي بوظيفرة مرمرة تر النبرا ر لر م نثل زعامة النموا الفضرعة كما ااه عقوم العدعد م الوظائ الفسى ية المرمرة لىنبرا حيرا ااره عردنل تر تقوع البررتي راالحمان النورعرة ر القىوررتيرل راالاهعمرا رالفيتامينرا رالررموارا النباتيرة ر ااره عردنل ت تقوع االغشية الفىوعة رمركبا النااة راالميدا ابو عاح 1989( شقل 1( تأالير المستحضر الحيوي لبقترعا.B subtilis عىخ تركيه النتررجي ت ابا الذرة الرفراء عنصر الفسفور :- اظررر اتررائ التحىيررل االحرررائ تر الشررقل 2( اال اعىرخ تركيره لعنررر الفسرفور كرراال ترر النباترا المعامىرة برالفنرA.flavus رالمستحضرر الحيروي رالمعامىرة برالفنر A.niger رالمستحضرر الحيروي ا بىغرب التراكيه 0.52 ر 0.47 رمىغم /لتر عىخ التوال بتفوج معنوي عىخ المعامث االنر كما اظرر المعرامث A.flavus تقر رA.niger تقرر تررارراأ معنوعررة عرر معامىررة المقارارة ا بىغرب التراكيره 0.47 ر 0.45 ر 0.46 مىغم/لتر عىخ التوال تعوم الهعرامة الحاصرىة تر اسربة الفسرفور الرراج النباترا المعامىرة بالمستحضرر الحيروي الرخ اردرة البقترعرا Bacillus subtilis عىرخ زعرامة جاههعرة عنررر الفسرفور عر طرعرق اردرترا عىرخ تحىيرل الررفور الغنيرة بالفسفور أرع طرعق زعامة تركيه بعا االعوارا عىرخ سرنح ال رذرر اتي رة تواجرد أارواو البقترعرا المشر عة لىنمو رمنرا.B subtilis مما عهعد م امتراص العناصر المغذعة االنر رمنرا الفسفور 1995 Glick Bertr رجماعتره 2000( تقرد كررYao رجماعتره 2006( اال البقترعرا.B subtilis FZB24 رترر العناصرر الغذائيرة المرمرة لنمرو النبرا مثرل الفسرفور رالنترررجي رالقراربوال تضرثأ عر ااررا ت عرل العناصرر الغذائية بشقل جاهه لىنبا ربالتال زعامة ت كمية المغذعا المأنو ة حيا عؤمي الفسفور رظائ مرمة لىنبرا حيرا عقروال االسرترا مر م رامي الريدرركسريل ر ااره عردنل مر النترررجي تر بنراء االغشرية الفىوعرة رتقروع مركبا النااة راالحمان االمينية ر ااه عفهال ت االعضاء الثمرعة ت البرذرر عىرخ هيرأة الفراعتي )phytin

9 رهو مىح القالسيوم رالمغنسيوم لحاما الفاتير phytic acid ا اال الفراعتي لره أالرر مررم تر عمىيرة االابرا ابو عاح 1989( شقل 2( أهمية المستحضر الحيوي لبقترعا.B subtilis ت زعامة تركيه عنرر الفسفور ت ابا الذرة الرفراء عنصر البوتاسيوم:- عتضررح مرر الشررقل 3( رجرروم انررتثف معنرروي ترر تركيرره عنرررر البوتاسرريوم ا بىغررب تراكيرره عنرررر البوتاسيوم ت النباتا المعامىة برالفنر A.flavus تقر رA.niger تقر 4.91 ر 4.39 مىغرم /لترر عىرخ التروال تىترا اباتا المقاراة مرال أي معامىة بتركيه 3.81 مىغم/لتر أما النباتا المعامىة بالفنرA.flavus رالمستحضر الحيروي رالمعامىرة برالفنر A.niger رالمستحضرر الحيروي تقرد بىغرب التراكيره تيررا 3 ر 2.55 مىغرم /لترر عىرخ التوال اال السبا ت ااففان اسربة البوتاسريوم تر هراتي المعرامىتي ارد ععروم الرخ عردم تروتر االليرا لرد البقترعا.B subtilis عىخ زعامة جاههعة عنرر البوتاسيوم لىنباتا

10 شقل 3( تأالير المستحضر الحيوي لبقترعاsubtilis.B تركيه عنرر البوتاسيوم ت ابا الذرة الرفراء A.niger 4( أال اعىررخ تركيرره لعنرررر الحدعررد كرراال ترر المعررامث بررالفنر عنصر الحديد:- عتضررح مرر الشررقل رالمستحضرر الحيروي ا بىغرب تقر رالمعامىرة برالفنرA.flavus رالمستحضر الحيوي رمعامىة الفنررA.niger رمعامىرة المقارارة ا بىغرب ر تقر جميعا مىغم /لتر تىترا المعامىرة برالفنر A.flavus مىغم /لتر عىخ التوال شقل 4( مرر المستحضر الحيوي لبقترعا.B subtilis ت تركيه عنرر الحدعد ت ابا الذرة الرفراء ت زعامة اسبة الحدعرد تر النباترا رتظرر النتائ عدم اع ابية المستحضر الحيوي م الفنر A.niger الخ المستحضر الحيروي عىرخ حري عنرا ت معامىة A.niger بمفرمة رهذا ععن اال التأالير ععوم الخ الفنر رلي كاال لىمستحضر الحيوي االر راعح ت زعامة العنرر ت معامىة الفنر A.flavus رالمستحضر الحيوي تقدير كمية الكلوروفيل a و b:- االر جمي تراكيه المستحضر الحيوي لبقترعا Bacillus subtilis اع ابيا ت زعامة كمية القىوررتيل a ت ارراج اباتا الذرة حيا بىغب ت النباتا النات ة ع الحبوب المىوالة بالفنر A.flavus رالمعامىة بالمستحضر الحيوي بتركيه 20 غم/كغم حبوب 5.36 مىغم/ 100 غم تىترا النباتا المىوالة بنف الفنر رالمعامىة بالمستحضر الحيوي بتركيه 10 غم/كغم ربقمية 5.28 مىغم/ 100 غم اما كمية القىوررتيل ت النباتا النات ة ع الحبوب المىوالة بىقاح الفنرA.niger رالمعامىة بالمستحضر الحيوي بالتراكيه المفتبرة 5 ر 10 ر 20 (غم/كغم تقااب 3.5 ر 5.2 ر 4.7 (مىغم / 100 غم عىخ التوال مقاراة بالنباتا النات ة ع حبوب مىوالة بالفنر افسه رغير معامىة بالمستحضر الحيوي رالبالغة 2.4 مىغم / 100 غم شقل 5( رعند استعران اتائ تأالير المستحضر الحيوي ت كمية القىوررتيل b ت النباتا المعامىة بالمستحضر الحيوي رالمىوالة بالفنرع A.flavus رA.niger ا دها زام ع كميترا ت النباتا النات ة ع الحبوب المىواله بالفنرع ك أل عىخ حد رالفالية م المستحضر الحيوي ا بىغب عند التركيه 20 غم/كغم حبوب 3.52 ر 3.46 (مىغم/ 100 غم ت حي كااب عند التركيه صفر /كغم( 1.28 ر 1.16 ( مىغم/ 100 غم شقل 6( راد ععه سبا الهعامة الحاصىة ت كمية القىوررتيل القى ت ارراج النباتا المعامىة بالمستحضر الخ ادرة البقترعا.B subtilis عىخ توتير كميا أعاتية م العناصر المغذعة رهذا ما أالبتته هذ الدراسة ت الفقرة السابقة الت أكد عىخ زعامة عدم م العناصر المعداية المفتىفة الت بدررها تنعق عىخ زعامة كمية القىوررتيل تهعامة اسبة النتررجي عهعد م ترني القىوررتيل ا اال %70) م اتررجي الوراة عدنل ت تركيا هذ الربغة راال

11 الرحاف 1989( أما الحدعد تإال له المحتو القى لىنتررجي البثستيدا الفضر تحتوي عىخ اكثر م ار الفضر أ بي أالر تعال ت زعامة محتو القىوررتيل م نثل تأالير ت زعامة أعدام رأح ام البثستيدا الفاصة بتفىيق القىوررتيل رزعامة أعدام القراا 1993( أال لىحدعد االر مرم ت العمىيا Guller رKracko ت البثستيدا الفضر م نثل تأالير ت تعاليا األكسدة راالنتهال الفاصة بتقوع القىوررتيل رأشار محمد 2002( الخ أال الحدعد عشترك ت رظائ العمىيا الحيوعة المرمة لىنبا ع طرعق منوله عامثأ مساعداأ )cytochromes الت ت تقوع القىوررتيل لىنبا كأشتراكه ت المركبا الحيوعة المرمة مثل السيتوكررما رعمىية ركذل مركا freedoxin المرم ت عمىية البناء الضوئ تدنل ت عمىيت البناء الضوئ رالتنف االرراج أهمية ت زعامة (nitrate reduction ر اال لهعامة عنرر البوتاسيوم ت االنتهال النترا الخ أموايا ر Panwar الفضر راقره عؤمي الخ هدمرا الرحاف 1989( رهذا ما أشار اليه Ompal البثستيدا مراسة تم تيرا معامىة حبوب الحننة ببقترعا Subtilis..B رbrasilense Azospirillum 2000( ت تحب الظررف الحقىية ا رجد باال استفدام هذ البقترعا ام رزراعترا لمعرتة تأاليرهما ت تحسي امو النبا م حيا القتىة الحيوعة زعامة النات الخ زعامة كبيرة ت المساحة الوراية رتركيه القىوررتيل تضثأ ع النات ة م الحبوب المعامىة بالتراكيه العيااية لنبيعية امو النباتا المثحظا رحاصل الحبوب ر أشار النات ة م البذرر غير مقاراة بالنباتا المفتىفة م المستحضر الحيوي الخ رجوم تحس جيد ت امو النباتا المعامىة بالمستحضر الحيوي صور 1 ر 2 ). شقل 5 (:تأالير تراكيه المستحضر الحيوي ت كمية القىوررتيل a ت ابا الذرة الرفراء

12 شقل 6 (:تأالير تراكيه المستحضر الحيوي ت كمية القىوررتيل b ت ابا الذرة الرفراء B A C A

13 D A صورة A. 1( تأالير تراكيه المستحضر الحيوي عىخ امو ابا الذرة الرفراء رالمىوالة برالفنر flavus C- تركيه ( 10 غم/كغم( D- تركيه (20 غم/كغم( A- المقاراة B- تركيه 5 غم/كغم ) B A C A

14 D A صرورة 2( ترأالير تركيره المسرتحضر الحيروي عىرخ امرو ابرا الرذرة الررفراء رالمىوالرة بالفنرر A.niger - D تركيه( 10 غم/كغم( C تركيه 5 غم/كغم ) تركيه( 20 غم/كغم ( B تنر تق -A المصادر :- المصادر العربية :- مصيطفى )2000(. النررج العمىيرة وابيراهيم درويي ابيراهيم ع عاصيف محميد و محميد نظييف حجيا لتقدعر المقواا القيميائية لثاس ة النباتية النبعة االرلخ منشأة المعارف االسقندرعة أبو ضاحي ع يوسف محمد )1989( جامعة الموصل 228 صفحة تغذعة النبرا العمىر منبعرة رزارة التعىريم العرال رالبحرا العىمر الجميلي ع سامي عبد الرضا ع ثامر خضير مرزة و االء عبد علي الخفيا )a2007(. تقيريم كفراءة المبيردع الحيروعي تىوراميرل رالباسرىي عىرخ مررن اقرص رمرو البرامرا المتسربا عر الفنرر Pythium aphandermatum لنبا الفيار ت الحقل م ىة جامعة كربثء العىمية الم ىد 5( العدم االرل( الجميلي ع سامي عبد الرضيا وموسيى نعمية مزهير )2008( ترأالير عنررري البروررال رالمنغنيره تر امرو البقترعرا Bacillus cereus راردرترا عىرخ ااتراج الررموارا المرؤتمر العىمر االرل لىعىروم الرررتة رالتنبيقية ل امعة القوتة الصحا ع فاضل حسين )1989(. أاظمة الهراعة بدرال استفدام تربة رزارة التعىيم العال جامعة بغدام عبد الرضا عسامي و طه ياسين وعادل العنسي ) 2004 (.تقامل لقراح بقتررعا Pseudomonas ت مقارمة مرن الذبول الفيوزارم ت النماطة م ىرة جامعرة بابرل لىعىروم putida رمبيد Bayelton 9( العدم 3( الررتة رالتنبيقية.الم ىد محمدععبد العظيم كاظم )2002(. أساسيا تغذعرة رتسرميد النبرا العراج 331 صفحة مقترا المررري لتوزعر المنبوعرا

15 محمد ععبد العظيم و مؤيد أحمد اليونس ) 1991 (.أساسيا تسريىوجيا النبرا رزارة التعىريم العرال رالبحرا العىم جامعة بغدام 461 صفحة المعموريع كيوثر فاضيل )2008( تقامرل المبيرد الحيروي الباسرىي مر المبيرد القيميراري الرعردرميل رسرمام الفسرفور تر السرينرة عىرخ مررن مرو البرامرا لمحررول النماطرة المتسربا عر الفنرر Pythium 78 صفحة aphandermatum ميخائييلع سيمير و تركيي بييدر) 1982 ( 190 صفحة أمرران البرذرر مار القترا لىنباعرة ر النشرر- جامعرة الموصرل المصادر االجنبية :- Akpa, E. P.; Jacques, B. ;Wathelet, M. ; Paquot, R. ;Fuchs, H. ; Budzikiewic,z. and Thonart, P. (2001). Influence of culture conditions on lipopeptide production by Bacillus subtilis. Applied of Biochemistry and Biotechnology, 91-93: Bertr, H.;plassard,C.; pinochet,x.; Toraine,B. ; Normand,P. and Cleyet- Morcael,J.C.(2000). simulation of The ionic transport grown promoting rizobacterium (Achromobacter sp.) Candin Journal of Microbiology. 68: Collee, J.G.; Fraser, A.G.; Marmion, B.P. and Simmons, A. (1996). Practical Medical Microbiology. Mackie & MaCarthey, Pearson professional limited. 14 th ed. Chen, J. (2006).the combined of chemical and organic fertilizers and / or biofertilizer for crop growth and salt fertility.international Workshop on Sustained Management of the Soil-Rhizosphere System for Efficient Crop Production and Fertilizer Use.( Bangkok ) : Garbaye, J.(1994). Helper bacteria : a new dimension to the Mycorrhizal symbiosis. New phytologist.128(2): Glick,B.R.(1995).the enhancement of plant grown by free living bacteria. Candin Journal of Mcrobiology. 41: Guller, L. and Kracko,M.(1993). Ultra structure of grape vine chloroplast under Mgandfedeficiencies. photosynthestica. 29(3) : Harboren,J.B. (1973). Phyto chemical methods. Chapman and Hall. (London) Jackson,C.R.(1965). Aspergillus corwn rot of Peanuts in Georgia, seed treatment fungicidrs for control of seed born fungi in Peanut. Plant Disease Reporter,46: Kinsinger, R.F.; Shirk, M.C.; and Fall, R. (2003). Rapid surface Motility in Bacillus subtilis is dependent on extracellular surfactin and potassium ion. Journal of Bacteriology. 185: Krebs,C.J.(1978). Ecology : The experimental analysis of distribution and abundance Harper and Row publisher,new York. Leclere, V.; Bechet, M.; Adam, A.; Guez, J. S.; Wathelet, B.; Ongena, M.; Thonart, P.; Gancel, F.; Chollet-Imbert, M. (2004)

16 Functional significance of a periplasmic Mn-superoxide dismutase from Aero monashydrophila. Journal of Microbiology. 96, Mcspadden Gardener,B.B.(2004). Ecology of Bacillus and paenibaillus spp.in agricultural systems. American. phytopathological Society. 94: Ompal,S. and panwar J.D.S,(2000).Response of Azospirillum and Bacillus on growth and yield of wheat under field conditions. Indian Journal of Plant Physiology. 5 ( 1): Prakash,A.P. and Podil,A.R.(1996).Lysis and Biological control of Aspergillus niger by Bacillus subtilis AF1,candin Journal of Microbiology.42(6): Raper, K.B. and Fennel,D.I.(1965). The genus Aspergillus Williams and Wilkins company. Baltimore.pp :686. Yao, A.; Bochow, H.; Karimov, S.; Boturov, U.; Sanginboy, S.; Sharipov, A. (2006).Effect of FZB 24- Bacillus subtilis as a biofertilizer on cotton yields in field tests Archives of Phytopathology and Plant Protection. 39( 4): Young, C.C.; Lai, W.A.; Shen, F.T.; Hung, M.H.; Hung, W.S. & Arun, A.B. (2003). Exploring the microbial potentially to augment soil fertility in Taiwan. In Proceedings of the 6th ESAFS International Conference: Soil Management Technology on Low Productivity and Degraded Soils,Taipei. (Taiwan). pp Zaehringer,M.V; Davis,K. and Dean, L.(1974).persistent Green color snap beans color related constituents and quality of cooked fresh beans. Journal of American science.99: Bioformolation for Bacillus subtilis in corn growth which its three months storage after inoculation with Aspergillus flavus and Aspergillus niger Abstract Treated seeds are cultured after three months of storge, and germination rate reached to 100% when compared with control 83% (seeds not treated with the bio formulation or any of the two fungi),were reduction in damping off from 83% to 0% by using the bio formulation at the cncentration of 20 gm/kg with the presence of incuolum A.niger.The estimation of Macro and Micro mineral elements in leaves of plants result from seeds that treated with the bio formulation at the concentration 5 gm/kgm after three weeks,the Nitrogen, phosphor and Iron rate were 0.96, 0.52 and mg/l respectively,also, chlorophyll a & b in the leaves of plants result from seeds that treated with the bio formulation especially at the concentration of 20gm/kg. The amount of chlorophylla &bwere5.3and 3,4 mg/100 gm constantly

17